科研服務(wù)
SCIENTIFIC SERVICE
基因敲除細(xì)胞系的建立
1.服務(wù)信息
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流程分布 |
周期工作日 |
提交內(nèi)容 |
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CRISPR設(shè)計(jì) |
2 |
專業(yè)設(shè)計(jì)報(bào)告 |
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客戶確認(rèn) |
1-2 |
客戶回復(fù) |
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引物合成 |
2 |
獲得引物 |
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質(zhì)粒構(gòu)建，引物測(cè)試及目標(biāo)基因擴(kuò)增 |
6 |
階段報(bào)告 |
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質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞 |
6-8 |
階段報(bào)告（提供熒光照片） |
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活性驗(yàn)證 |
7-10 |
階段報(bào)告 |
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獲得單克隆細(xì)胞 |
35 |
獲得30個(gè)細(xì)胞株 |
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單細(xì)胞株突變體鑒定 |
10 |
總結(jié)報(bào)告 |
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總周期：3-3.5月 |
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2.基因組編輯動(dòng)物細(xì)胞系建系流程圖：
3.服務(wù)流程
案例說(shuō)明
Ｘ建立基因組編輯細(xì)胞系的優(yōu)選策略之多個(gè)sgRNA同時(shí)使用以高效實(shí)現(xiàn)目標(biāo)基因的靶向突變：
雖然有報(bào)道利用一對(duì)sgRNA，可以刪除長(zhǎng)至200 kb的基因組DNA片段，但是刪除100-200 bp相較而言更容易實(shí)現(xiàn)，更為重要的同時(shí)使用多個(gè)sgRNA，可顯著提高基因組靶向突變的成功率，如果實(shí)現(xiàn)刪除則有利于后面篩選時(shí)的基因型鑒定。
在哺乳動(dòng)物的基因組編輯中，一般建議同時(shí)使用(測(cè)試)3個(gè)sgRNA
以提高工作效率
參考文獻(xiàn)
Ｘ參考文獻(xiàn)
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